高效液相色谱法测定阿司匹林_高效液相色谱法测定乙肝解毒胶囊中黄芩苷的含量

高效液相色谱法测定乙肝解毒胶囊中黄芩苷的含量
　　
　　作者：何瑞荣 李容茂 丁少波 谢家隆
　　
　　【摘要】  目的 建立乙肝解毒胶囊中黄芩苷的含量测定方法。方法 采用RPHPLC法，以Supelco C18（250 mm×4.6 mm,5 μm）柱为色谱柱，流动相为甲醇0.36%磷酸（体积比42∶58）， 流速为1.0 mL·min-1, 检测波长为276 nm.结果 黄芩苷质量浓度在0.081 6——0.408 6 mg/mL范围内与峰面积线性关系良好，回归方程为A=52.61ρ-0.374 8,r=0.999 4 （n=5）；平均回收率为98.30%（n=5）， RSD为1.23%.结论 本方法操作简便、结果准确，可用于本品的含量测定与质量控制。
　　
　　【关键词】  反相高效液相色谱法；乙肝解毒胶囊；黄芩苷；含量测定
　　
　　Abstract:Objective To develop the quantification method for baicalin in Yigan Jiedu capsules.Methods RPHPLC was used in the determination of baicalin in Yigan Jiedu capsules with Supelco C18 column （250 mm×4.6 mm,5 μm）； mobile phase: methanol0.36% phosphoric acid （42∶58）； flow rate: 1.0 mL/min; and detection wavelength: 276 nm. Results The mass concentration of baicalin showed good linear correlation with pear area in the range of 0.0816——0.4086 mg/mL, the regression equation: A=52.61ρ-0.374 8,r=0.999 4 （n=5） ; the average recovery 98.30%（RSD 1.23%）。 Conclusion  The method was simple and reliable, which could be used in the assay and quality control of Yigan Jiedu capsules.
　　
　　Key words:RPHPLC; Yigan Jiedu capsules; baicalin; assay
　　
　　乙肝解毒胶囊由黄柏、黄芩、大黄等8味中药组成，主治肝胆湿热内蕴所致的肝区热痛、全身乏力、口苦咽干、大便干结、小便黄少、舌苔黄腻等，临床上用于乙型肝炎、辨证属于肝胆湿热内蕴者[1].该药收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第一册，该标准只作常规检查要求。为控制产品质量，笔者采用 RPHPLC法对制剂中的黄芩苷进行含量测定，方法简便准确，对控制产品质量具有参考价值。
　　
　　1  仪器与试药
　　
　　高效液相色谱仪（DIONEX P680 HPLC PUMP），ASL100 AUTOMATED SAMPLE INJECTOR全自动进样器，DAD紫外检测器；HN1006型超声仪。Sartoius BP211D型电子天平。 黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110715200212）；乙肝解毒胶囊（澳门泳江制药厂，批号：070701、20070101、20070102、20070103）；甲醇为色谱纯；磷酸为分析纯；水为双蒸水。
　　
　　2  方法与结果
　　
　　2.1  色谱条件
　　
　　色谱柱为Supelco LC18DB（250 mm×4.6 mm,5 μm）；流动相为甲醇0.36%磷酸（体积比42∶58）；流速为1.0 mL/min;检测波长为276 nm;进样量为10 μL.
　　
　　2.2  溶液的制备
　　
　　2.2.1  对照品溶液的制备    精密称取黄芩苷对照品适量，用甲醇制成每1 mL含黄芩苷0.040 8 mg的溶液，即得。
　　
　　2.2.2  供试品溶液的制备  取装量差异项下的供试品0.25 g,精密称定，精密加入流动相10 mL,称定重量，置超声仪中（功率500 W,频率50 kHZ）超声1 h,冷却至室温，用流动相补足重量，摇匀，滤过，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即可。
　　
　　2.2.3  阴性对照品溶液的制备  按处方比例取除黄芩外的其他药材，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。
　　
　　2.3  系统适用性试验
　　
　　精密吸取“2.2.1”项下溶液10 μL,按“2.1”项色谱条件进样测定5次，记录黄芩苷峰理论塔板数。结果显示，黄芩苷峰理论板数为3 928.
　　
　　2.4  线性关系考察
　　
　　精密称取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含40.8 μg的溶液。分别精密吸取2、4、6、8、10 μL,注入色谱仪，记录峰面积，以溶液质量浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程为A=52.61ρ-0.3748（r=0.999 4）。结果表明黄芩苷质量浓度在0.081 6——0.408 0 mg/mL范围内线性关系良好。
　　
　　2.5  加样回收率试验
　　
　　取同一供试品（批号：070701）6份，各约0.25 g,精密称定，分别加入黄芩苷对照品适量，按“2.2.2”项方法制备溶液，再分别按“2.1”项色谱条件进样测定，结果平均回收率为98.3%,RSD为1.23%（n=6），见表1.
　　
　　2.6  重复性试验
　　
　　取同一供试品（批号070701），精密称取1份，按“2.2.2”项方法制备溶液，按“2.1”项色谱条件重复进样测定6次，结果峰面积RSD值为1.30%（n=6），表明方法的重复性良好。表1  加样回收率试验结果
　　
　　2.7  专属性试验
　　
　　分别取黄芩苷对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各10 μL,注入色谱仪，记录色谱图。结果阴性样品在与对照品相应的位置无相应的峰，表明阴性无干扰，见图1.
　　
　　2.8  稳定性试验
　　
　　取同一供试品（批号070701），按“2.2.2”项方法制备溶液，按“2.1”项的色谱条件，分别于1、3、5、8、10 h进样测定，结果峰面积RSD值为0.35%,表明供试品溶液在10 h内测定结果稳定。
　　
　　2.9  样品含量测定
　　
　　分别按“2.2.2”项下操作，制备不同批号（20070101、20070102、20070103）的供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进行测定。结果3个批号样品所测得平均含量分别为0.794、0.809、0.797 mg/粒。
　　
　　3  讨 论
　　
　　3.1  不同产地的黄芩紫外光谱吸收强度不一致，本品在264、276 nm处有最大吸收[2-3],由于处方中的黄柏、大黄等成分在264 nm处有干扰，因此选择276 nm作为测定波长。
　　
　　3.2  取同一供试品（批号070701）

本文来源：https://www.lzjjdc.com/news/14223/